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2015-08-02瓊脂糖凝膠6FF使用說明

瓊脂糖凝膠6FF
瓊脂糖凝膠6FF是在瓊脂糖凝膠6B的基礎上經過兩次交聯形成的高交聯基質,微球的化學穩定性及物理性能顯著增強,剛性增加,流速更快,使產品處理時間大大縮短。可用于生物大分子的凝膠層析。
1 外觀
本品為白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質。
2 理化指標
項    目 指    標
基   質 6% 交聯瓊脂糖
排阻極限 10000~4×106 (球蛋白)
形狀 球形
粒徑 45~165 μm
最高流速 300 cm/h*
耐壓 0.20 MPa
pH適用范圍 2~14 (短時間,在位清洗),2~12(長時間)
化學穩定性 以下溶液中40℃下穩定:
2mol/L NaOH;70%EtOH;30%異丙醇;30%乙腈;1%SDS;6mol/L鹽酸胍;8mol/L尿素
 
    *檢測條件: 層析柱10mm×300mm  *柱床高15cm,25℃, 流動相為0.1mol/LNaCl
3 包裝
產品以聚胺酯瓶密封包裝,外貼標簽,注明“品名、體積、顆粒大小” 等內容。
4. 貯存
產品應密封貯存在4℃~25℃(保存溶液為20% 乙醇),通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過的柱子貯存在4℃(20% 乙醇)。
5 注意事項
本品應避免與氧化劑接觸,避免長時間暴露在空氣中。
6 運輸
運輸中應避免日曬、雨淋、重壓,嚴禁與有毒、有害物品混運。
7 保質期
5年。
8 應用
本產品具有很高的化學穩定性、高流速、較好的機械性能、可多次重復使用等特點,非特異性吸附低,回收率高,可用有機溶劑及1~2mol/L 的NaOH在位清洗,適用于工業規模生產,廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質、核酸及多肽的凝膠色譜純化。
下面簡要介紹介質的使用過程。
8.1 裝柱
凝膠過濾介質的使用對裝柱的要求較高,為了保證分離效果,一般通過柱子上加一個裝柱器來使分離柱裝滿凝膠,或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進行檢驗。
以下過程為通用介質裝填過程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子,可在柱床穩定后將柱床壓緊,接好管路。
(1)讓所有的材料和試劑達到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。
(2)選擇一根一定直徑的柱子,長約30~60cm,根據柱子大小取所需量的凝膠(約為柱床體積的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。
(3)將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務必使底端無氣泡。
(4)用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。
(5)打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩定。用緩沖液平衡柱子,到柱床穩定。
(6)最好用一個裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平,上好柱頭。
8.2 平衡
讓緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和pH不變。
8.3 上樣
(1)樣品用緩沖液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。含鹽量過大、濃度過小的樣品要先做處理,再上樣。
(2)介質對樣品組分的分離是按組分分子量大小進行的,分子量大的先流出來。
(3)上樣體積約為柱體積的1~2%,越小分離越好。
8.4 洗脫
用緩沖液洗脫,洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。
8.5 再生
一般用緩沖液洗到平衡,可再次使用。
8.6 注意
在裝柱、使用和保存柱子的時候,始終要避免柱子流干氣泡進入。
若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
8.7 在位清洗
(1)對于以離子鍵結合上去的蛋白,可以用2M Nacl去除。
(2)對沉淀蛋白、對以疏水性結合的蛋白或脂類,可用1M NaOH 去除。
(3)對強疏水性結合的蛋白、脂類等,用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產生氣泡。
清洗完畢后,用至少3倍緩沖液平衡柱子。
8.8 注意
在裝柱、使用和保存柱子的時候,要避免柱子流干氣泡進入。
8.9 去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時。或用以下方法步驟去除:
(1)2倍柱體積的70%乙醇;
(2)2倍柱體積50mM Tris-Hcl pH7.5;
(3)1倍柱體積4M尿素;
(4)3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl;
以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。
8.10 消毒
用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。
 
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